載體構(gòu)建克隆

　　載體構(gòu)建克隆（vectorconstruction）是分子生物學(xué)研究常用的手段之一。依賴于限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和其它修飾酶的作用，分別對目的基因和載體DNA進(jìn)行適當(dāng)切割和修飾后，將二者連接在一起，再導(dǎo)入宿主細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)目的基因在宿主細(xì)胞內(nèi)的正確表達(dá)。載體構(gòu)建主要包括已有載體多克隆位點(diǎn)MCS的改造和已有載體啟動子、增強(qiáng)子、篩選標(biāo)記等功能元件的改造。載體構(gòu)建完成后可利用PCR原理進(jìn)行測序驗(yàn)證。

　　載體構(gòu)建克隆實(shí)驗(yàn)步驟：

　　1）引物設(shè)計(jì)，PCR擴(kuò)增目的片段

　　2）酶切目的片段與載體

　　3）連接或重組

　　4）載體構(gòu)建轉(zhuǎn)化

　　5）涂板

　　6）挑取克隆酶切或PCR鑒定

　　7）載體構(gòu)建測序驗(yàn)證

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